Que tipo de configuração de câmera é necessária para tirar fotos da luciferase?


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Estou trabalhando com luciferase que tem um comprimento de onda azul de 480 nm e quero poder tirar uma foto dela. O problema é que consigo ver a luciferase brilhando em toda a sua glória na minha frente, mas não importa o quanto tente, não posso tirar uma foto da luciferase com minha DSLR (Nikon D80) usando uma lente Nikon de 50 mm e uma lente Nikon 35 mm. Eu tentei remover os filtros (Nikon L37 e Hoya UV).

Estou curioso para saber se falta uma determinada lente / filtro ou se devo fotografar usando uma configuração de iluminação diferente. Eu já estou expondo para 30 "em f / 22 na ISO 1600. Talvez mais?


Qual é a sua configuração de iluminação?
MikeW

Eu suspeito que são necessários tempos de exposição muito mais longos (. E na escuridão absoluta O mesmo que fotografar estrelas à noite, por exemplo. Acho que um EV -5 / -6, então você precisa de muito mais paradas para corrigir isso. Portanto, defina o ISO como 400, por exemplo, e comece com um tempo de exposição de 1 minuto em um diafragma F / 4.0.Algo visível? Diminua o tempo em 1 ponto, nada visível? Aumente para 800 iso e assim por diante, brinque com ISO e tempo para manter a qualidade
Caspar Kleijne

Em um quarto escuro. como o brilho se compara aos marcadores luminosos de horas em um mostrador de relógio de pulso? Veja minha imagem abaixo. Eu suspeito que sua luciferase deveria ser mais brilhante que isso.
Russell McMahon

A luciferase será realmente mais maçante que um relógio de pulso (dependendo das concentrações). Estou usando uma sala completamente escura.
precisa saber é o seguinte

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Não, não é um idiota, você foi esperto o suficiente para nos encontrar para ajudar, lol! Ainda bem que está trabalhando agora.
MikeW

Respostas:


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Esse comprimento de onda está certamente dentro do espectro que você pode capturar com qualquer lente, com ou sem filtros. Os sensores digitais capturam entre 350-1000nm. Se estiver brilhando, convém que essa seja sua principal fonte de luz. Qualquer luz adicional que você lançar sobre ela diluirá o brilho do objeto e dificultará a visão.

Que abertura você está usando? A menos que isso seja incrivelmente escuro, não consigo imaginar 30 "não capturando algo, a menos que você esteja usando uma abertura muito pequena.

Você está fazendo isso em um quarto escuro com fundo escuro? O que você vê nas suas exposições de 30 "?

Por tentativa e erro, você pode executar uma variedade de velocidades do obturador (e ISO) para tentar obter um bom valor de exposição. Se conseguir vê-lo com os olhos, poderá fotografá-lo sem equipamento especial.


Estou usando o f22, ISO 1600. Também me confunde.
precisa saber é o seguinte

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Oh Deus, f / 22 - aí está o seu problema. f / 22 com 30 segundos definitivamente não vai conseguir. Abra o máximo ( número f menor ) possível - pelo menos para começar. f / 22 basicamente significa que há um tamanho de luz perfurado.
Rfusca 7/03

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Se houver outra luz presente, ela pode "lavar" facilmente a luminescência de baixo nível. Você não deve ter outra luz para começar.

Focalize com uma luz acesa. Use o foco manual ou, se sua câmera permitir, defina o foco manual, alterne temporariamente para AF, foque e depois volte para MF para focar a câmera.

Em seguida, desligue a iluminação para que a luciferase seja a única fonte de iluminação, exponha a partir daí e veja o que você obtém.

Se isso não funcionar, a exposição manual e a focagem manual permitem controlar o que a câmera faz e expor em uma variedade de exposições prováveis.

Eu apenas tentei fotografar meu mostrador de relógio de pulso luminoso não especialmente brilhante na escuridão total. A 250 mm e observe a cerca de 500 mm de distância, o relógio ocupou 1/3 da largura da exposição do quadro e foi de 6 segundos a f5,6 a 800 ISO. Os marcadores de horas individuais, que não são muito brilhantes para os olhos à luz da sala, brilham intensamente na foto quando são a única fonte de luz.

Assim. Focar "poderia ter sido muito melhor [tm] :-)

6S, f5.6, ISO800.

insira a descrição da imagem aqui

As principais perguntas são: você está usando outra iluminação e o que ESTÁ vendo em suas imagens.

Essas muitas imagens de Luciferase sugerem um nível de luz razoável e não parecem difíceis de fotografar.

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