Que tipo de configuração de câmera é necessária para tirar fotos da luciferase?


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Estou trabalhando com luciferase que tem um comprimento de onda azul de 480 nm e quero poder tirar uma foto dela. O problema é que consigo ver a luciferase brilhando em toda a sua glória na minha frente, mas não importa o quanto tente, não posso tirar uma foto da luciferase com minha DSLR (Nikon D80) usando uma lente Nikon de 50 mm e uma lente Nikon 35 mm. Eu tentei remover os filtros (Nikon L37 e Hoya UV).

Estou curioso para saber se falta uma determinada lente / filtro ou se devo fotografar usando uma configuração de iluminação diferente. Eu já estou expondo para 30 "em f / 22 na ISO 1600. Talvez mais?


Qual é a sua configuração de iluminação?
— MikeW

Eu suspeito que são necessários tempos de exposição muito mais longos (. E na escuridão absoluta O mesmo que fotografar estrelas à noite, por exemplo. Acho que um EV -5 / -6, então você precisa de muito mais paradas para corrigir isso. Portanto, defina o ISO como 400, por exemplo, e comece com um tempo de exposição de 1 minuto em um diafragma F / 4.0.Algo visível? Diminua o tempo em 1 ponto, nada visível? Aumente para 800 iso e assim por diante, brinque com ISO e tempo para manter a qualidade
— Caspar Kleijne

Em um quarto escuro. como o brilho se compara aos marcadores luminosos de horas em um mostrador de relógio de pulso? Veja minha imagem abaixo. Eu suspeito que sua luciferase deveria ser mais brilhante que isso.
— Russell McMahon

A luciferase será realmente mais maçante que um relógio de pulso (dependendo das concentrações). Estou usando uma sala completamente escura.
— precisa saber é o seguinte

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Não, não é um idiota, você foi esperto o suficiente para nos encontrar para ajudar, lol! Ainda bem que está trabalhando agora.
— MikeW

Respostas:


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Esse comprimento de onda está certamente dentro do espectro que você pode capturar com qualquer lente, com ou sem filtros. Os sensores digitais capturam entre 350-1000nm. Se estiver brilhando, convém que essa seja sua principal fonte de luz. Qualquer luz adicional que você lançar sobre ela diluirá o brilho do objeto e dificultará a visão.

Que abertura você está usando? A menos que isso seja incrivelmente escuro, não consigo imaginar 30 "não capturando algo, a menos que você esteja usando uma abertura muito pequena.

Você está fazendo isso em um quarto escuro com fundo escuro? O que você vê nas suas exposições de 30 "?

Por tentativa e erro, você pode executar uma variedade de velocidades do obturador (e ISO) para tentar obter um bom valor de exposição. Se conseguir vê-lo com os olhos, poderá fotografá-lo sem equipamento especial.


Estou usando o f22, ISO 1600. Também me confunde.
— precisa saber é o seguinte

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Oh Deus, f / 22 - aí está o seu problema. f / 22 com 30 segundos definitivamente não vai conseguir. Abra o máximo ( número f menor ) possível - pelo menos para começar. f / 22 basicamente significa que há um tamanho de luz perfurado.
— Rfusca 7/03

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Se houver outra luz presente, ela pode "lavar" facilmente a luminescência de baixo nível. Você não deve ter outra luz para começar.

Focalize com uma luz acesa. Use o foco manual ou, se sua câmera permitir, defina o foco manual, alterne temporariamente para AF, foque e depois volte para MF para focar a câmera.

Em seguida, desligue a iluminação para que a luciferase seja a única fonte de iluminação, exponha a partir daí e veja o que você obtém.

Se isso não funcionar, a exposição manual e a focagem manual permitem controlar o que a câmera faz e expor em uma variedade de exposições prováveis.

Eu apenas tentei fotografar meu mostrador de relógio de pulso luminoso não especialmente brilhante na escuridão total. A 250 mm e observe a cerca de 500 mm de distância, o relógio ocupou 1/3 da largura da exposição do quadro e foi de 6 segundos a f5,6 a 800 ISO. Os marcadores de horas individuais, que não são muito brilhantes para os olhos à luz da sala, brilham intensamente na foto quando são a única fonte de luz.

Assim. Focar "poderia ter sido muito melhor [tm] :-)

6S, f5.6, ISO800.

insira a descrição da imagem aqui

As principais perguntas são: você está usando outra iluminação e o que ESTÁ vendo em suas imagens.

Essas muitas imagens de Luciferase sugerem um nível de luz razoável e não parecem difíceis de fotografar.

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