Na minha instância, eu precisava ter duas imagens .iso anexadas como dispositivos ópticos durante uma instalação. Descobri que, depois de adicionar a segunda imagem ao controlador IDE, o VirtualBox deixou de reconhecer a primeira imagem como inicializável.
Após muitas tentativas e erros, consegui inicializar mais uma vez escolhendo Configurações> Armazenamento, selecionando a imagem .iso inicializável e alterando seus atributos para IDE Primary Slave .
Quanto vale a pena, também tive que alterar os atributos do outro dispositivo de imagem .iso para IDE Secondary antes que a opção Escravo Primário estivesse disponível para a imagem inicializável. Imagino que a ordem em que você adiciona as imagens à árvore de armazenamento possa determinar quais atributos são atribuídos a elas.